Меню

Мюллер кауфмана среда инструкция



Основа, приготовление и применение тетратионатного бульона

тетратированный бульон или TT бульон представляет собой селективную жидкую культуральную среду для обогащения и восстановления штаммов сальмонелл. Он был создан Мюллером, а затем модифицирован Кауфманом, поэтому есть те, кто называет его бульоном Мюллера-Кауфмана.

Исходная среда содержала протеозо-пептоны, карбонат кальция и тиосульфат натрия. Кауфманн добавил соли желчи и создал еще одну модальность с ярко-зеленым. Эти вещества подавляют рост колиформ, оставляя свободную среду для развития патогенных бактерий, в данном случае сальмонеллы.

Модификация была очень успешной, потому что она значительно увеличила чувствительность среды. Поэтому в настоящее время он полезен для поиска сальмонелл в образце любого типа, но особенно для твердых или жидких фекалий и продуктов питания..

Его подготовка состоит из двух этапов; коммерческая среда является основой для приготовления тетратионатного бульона, а затем для образования тетратионата добавляют йодированный раствор йода для завершения среды.

Американская ассоциация общественного здравоохранения (APHA) рекомендует использовать бульон тетионат с ярко-зеленым бульоном для обогащения образцов при поиске сальмонелл, поскольку он более селективен, чем бульон тетратионат и селенитовый бульон..

В общем, тетратионатный бульон идеален, когда подозревают бактерии рода Salmonella в небольших количествах или злоупотребляют воздействием ингибирующих веществ или промышленными процессами, которые сводят к минимуму их жизнеспособность..

  • 1 фундамент
  • 2 Подготовка
    • 2.1 — тетратионат
    • 2.2-Вариантный тетратионатный бульон с ярко-зеленым
  • 3 Использование
  • 4 Контроль качества
  • 5 рекомендаций
  • 6 Ссылки

фундамент

Настоящие пептоны соответствуют расщеплению казеина поджелудочной железой и пептическому перевариванию тканей животных. Они обеспечивают источник углерода, азота и питательных веществ в целом для роста бактерий..

В свою очередь тиосульфат натрия реагирует с йодированным раствором с образованием тетратионата. Это подавляет рост колиформ и способствует развитию бактерий, которые содержат фермент тетратионатредуктазу, в том числе род Salmonella, а также Proteus..

Соли желчи также действуют как ингибирующее вещество для большинства грамположительных бактерий и некоторых грамотрицательных бактерий (колиформ)..

Карбонат кальция поглощает токсичные вещества, образующиеся при разложении тетратионата, который образует серную кислоту. В этом смысле карбонат кальция нейтрализует кислотность, поддерживая рН стабильной среды..

В случае ярко-зеленой модальности это вещество увеличивает селективную силу тетратионатного бульона, подавляя другие микроорганизмы, кроме рода Salmonella..

подготовка

-Тетратированный бульон

Йод йод раствор

  • 6 гр йода.
  • 5 г йодистого калия.

Йодид калия растворяют в приблизительно 5 мл стерильной дистиллированной воды, затем йод добавляют понемногу, пока смесь нагревается. После полного растворения его наполняют стерильной дистиллированной водой до конечного объема 20 мл..

Половина основания для тетратионатного бульона

Взвесьте 46 граммов обезвоженной среды и суспендируйте в 1 литре стерильной дистиллированной воды. Смешайте и нагрейте до полного растворения, его можно кипятить всего несколько минут. Не стерилизовать в автоклаве. Основание среды оставляют охлаждаться до примерно 45 ° С и в это время добавляют 20 мл йодированного раствора..

После добавления раствора иодурада в среду следует использовать сразу. Если вы не хотите использовать всю смесь, действуйте следующим образом:

10 мл базовой среды распределяется по пробиркам, и только 0,2 мл йодированного раствора добавляется к тем, которые должны быть инокулированы образцами..

Те, которые не будут использоваться, могут храниться в холодильнике, однако, поскольку среда не стерилизована, идеальным является приготовление точного необходимого количества..

Цвет среды перед добавлением йодированного раствора йода молочно-белый с белым осадком, а после добавления коричневый с плотным осадком. Наблюдаемый осадок является нормальным и соответствует карбонату кальция, который не растворяется. Конечный pH среды составляет 8,4 ± 0,2..

-Тетратионатный бульон вариант с ярко-зеленым

Чтобы приготовить тетратионатный бульон с ярко-зеленым бульоном, все описанные выше стадии выполняются, но дополнительно к смеси будет добавлено 10 мл ярко-зеленого раствора, приготовленного в концентрации 0,1%..

Ярко-зеленый

Это решение готовится следующим образом:

Взвесить 0,1 г ярко-зеленого цвета и суспендировать в 100 мл дистиллированной воды. Нагреть до кипения, чтобы достичь полного растворения. Сохранить в янтарной бутылке.

использование

Для образцов кала (культура кала) протокол выглядит следующим образом:

Инокулировать 1 г твердого стула или 1 мл жидкого стула в пробирку с 10 мл готового к употреблению тетратионатного бульона. Энергично встряхните и инкубируйте при аэробиозе при 43 ° С в течение 6-24 часов..

Читайте также:  Посудомоечная машина bosch sms44gi00r инструкция

Затем берут аликвоту от 10 до 20 мкл бульона и пересеивают его в среде, селективной к сальмонелле, такой как агар SS, агар XLD, ярко-зеленый агар, кишечный агар Hektoen и другие..

Параллельно селективные среды для сальмонелл должны быть инокулированы прямым образцом (калом) без обогащения. Для образцов ректальных мазков загрузите материал, собранный в пробирку, и действуйте, как описано выше..

Для образцов пищи взвешивают 10 г твердой пищи или 10 мл жидкой пищи и инокулируют во флакон со 100 мл готового к употреблению тетратионатного бульона. Действуйте так же, как описано выше, но инкубируйте при 37 ° C.

Как видно, соотношение между пробой и бульоном всегда будет 1:10.

Контроль качества

Для тестирования культуральной среды можно использовать известные контрольные штаммы. Наиболее часто используемые штаммы сертифицированы ATCC..

Используемые штаммы Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella Abony DSM 4224, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Кишечная палочка ATCC 25922, Enterococcus faecalis ATCC 19433 и Золотистый стафилококк ATCC 25923.

Для штаммов сальмонеллы ожидается отличное развитие, в то время как Кишечная палочка может иметь слабое или регулярное развитие, а грамположительные штаммы (Enterococcus и Staphylococcus) частично или полностью ингибируются.

рекомендации

-Поскольку эта среда не ингибирует рост протеуса, некоторые лаборатории используют 40 мг / л новобиоцина для предотвращения развития этого микробного штамма. Антибиотик должен быть добавлен до йодированного раствора йода.

-После приготовления среды, включающей йодированный раствор йода, она не должна быть более 2 часов после инокуляции.

-В момент распределения среды в пробирках смесь должна непрерывно гомогенизироваться для ресуспендирования образовавшегося осадка..

-В менее загрязненных образцах тетратионатный бульон инкубируют при 35-37 ° С, а в сильно загрязненных образцах рекомендуется инкубация при 43 ° С..

Источник

105878 Mueller-Kauffmann Tetrathionate-Novobiocin Broth — Питательная среда — Тетратионатный бульон с новобиоцином

Питательная среда Мерк, Германия (Merck KGaA)

Тетратионатно-новобиоциновый бульон Мюллера-Кауфмана – Muller-Kauffmann Tetrathionate-Novobiocin Broth (MKTTn)

Кат.N 105878.0500
Упаковка — 500 г

Для селективного накопления сальмонелл из пищевых продуктов и кормов для животных в соответствии с ИСО 6579.

Принцип действия
Тетратионат образуется из тиосульфата, при добавлении йода к питательной среде. Тетратионат подавляет рост колиформных бактерий и других сопутствующих энтеробактерий. Тетратионат-редуцирующие бактерии (например, сальмонеллы и протеи) могут расти в этой среде. Образующиеся кислые продукты распада тетратионата нейтрализуются углекислым кальцием. Соли желчных кислот способствуют росту сальмонелл, значительно подавляют многие микроорганизмы, не являющиеся обычными представителями микрофлоры желудочно-кишечного тракта. Бриллиантовый зеленый и новобиоцин ингибируют грамположительную микрофлору.

Состав (г/л)

Мясной экстракт 4,3; пептон из казеина 8,6; хлорид натрия 2,6; карбонат кальция 38,7; тиосульфат натрия 30,5 ; соли желчных кислот 4,78, бриллиантовый зеленый 0,0096; новобиоцин 0,040.

Дополнительные компоненты:

Иодид калия 5,0 г, йод 4,0 г, растворенные в 20 мл дистиллированной воды.

Приготовление

Растворить 89,5 г/л воды, кратковременно нагреть до кипения и быстро охладить. Мутность полученного раствора обусловлена осадком карбоната кальция. Значение рН среды должно быть 8,0 ± 0.2 при температуре 25°C. Приготовленная основа питательной среды может храниться в холодильнике в течение в течение 4 недель при температуре 2-8 °C.

Не автоклавировать!

Перед началом работы к 1 л среды необходимо добавить раствор дополнительных компонентов (иодид калия 5.0 г, йод 4.0 г, растворенные в 20 мл дистиллированной воды). Среду асептично распределяют по стерильным пробиркам или флаконам.

Избегать нагрева среды!

Среда, готовая к употреблению, должна быть использована в тот же день. Готовая среда мутная, зеленого цвета, с белым осадком карбоната кальция.

Проведение анализа

1 мл исследуемого образца смешивают с 10 мл культуральной среды. Инкубируют 21-27 часов при 36-38°С и сеют штрихом на твердую питательную среду.

Контроль качества

Рост через 24 часа

Salmonella typhimurium ATCC 14028

Источник

Основа бульона Мюллера-Кауфмана с тетратионатом, 500г (ФСЗ 2009/03706) <в соотв. с ГОСТ Р 52814-2007)

Кат. № M876-500G

Питательные среды диагностические импортные - Основа бульона Мюллера-Кауфмана с тетратионатом, 500г (ФСЗ 2009/03706) <в соотв. с ГОСТ Р 52814-2007) - Основа бульона Мюллера-Кауфмана с тетратионатом, 500г (ФСЗ 2009/03706) <в соотв. с ГОСТ Р 52814-2007)

Читайте также:  Клавиатура mayhem gk 360dl инструкция

Цена: 3 953.00 RUB

Вы можете добавить товар в корзину, указав количество

Производитель: HiMedia Laboratories

Страна: Индия

Ед. изм.: упаковка

Упаковка: 500г

Вид упаковки: полиэтиленовая банка

Артикул: M876-500G

Тетратионатная среда — неселективная бульонная среда для эффективного обогащения и выделения сальмонелл из пищевых продуктов и клинических образцов. В виде сухого порошка и в гранулированной форме (GM876-500G). Гранулы обладают улучшенными потребительскими свойствами — больший срок годности, быстро растворяются, не пылят, не загрязняют поверхности лаборатории и исключают попадание мелких частиц в дыхательные пути персонала

Функциональное назначение

Предварительное элективное накопление сальмонелл необходимое при общей малой численности, поврежденном состоянии после кулинарной пищевой обработки и хранения. Состав идеального восстанавливающего бульона должен включать нейтрализующие токсические вещества, ингибирующие и обогащающие в пользу роста сальмонелл компоненты. Культуры предварительного обогащения инкубируют при 35-37 °С в течение 18-24 часов, а затем пересевают для выделения на селективные среды, к ним относят лактозный бульон (M026), тетратионатный (для пищевых проб) и среду Раппопорта Вассилиадиса (M880).
Состав тетратионатного бульона первоначально разработан Мюллером и улучшен Кауфманом, предложившим ввести бриллиантовый зеленый и препарат желчи (Ox bile) для подавления роста сопутствующих микроорганизмов и более эффективного выделения сальмонелл из продуктов животноводства, сточных вод (M016). Избирательность среды обусловлена присутствием тетратионата, образующегося в реакции между тиосульфатом и йодом. Гидролизат казеина и папаиновый перевар соевой муки содержат важнейшие питательные вещества для роста бактерий. Карбонат кальция буферизует среду, хлорид натрия поддерживает изотоничность.
Тиосульфат является источником серы, анионы тетратионата (S4O6) придают селективности среде обогащения. Бриллиантовый зеленый добавляют после нагревания среды, так как оно снижает его селективные свойства. Для подавления роста протеев можно добавить в среду 4 мг/л новобиоцина.
Одновременное использование разного типа селективных сред увеличивает выделение сальмонелл различных серотипов. Среда не подходит для культивирования Salmonella typhi, Salmonella sendai, and Salmonella pullorum и т.д. Так же на данном составе хорошо растут Морганеллы, поэтому для выросших колоний должны быть проведены подтверждающие тесты.
Готовая среда неустойчива и должна быть использована сразу после приготовления

Технические характеристики

Состав, грамм/литр:
Гидролизат казеина 7,00;
Папаиновый перевар соевой муки 2,30;
Натрия хлорид 2,30;
Кальция карбонат 25,00;
Натрия тиосульфат 40,70;
Ox bile (препарат желчи очищенной) 4,75.
Внешний вид: гомогенный сыпучий кремовый порошок. С добавлением бриллиантового зеленого и раствора йода — светло-зеленого цвета опалесцирующий раствор с высокой интенсивностью белого осадка.
Форма выпуска: непрозрачные водоотталкивающие пластиковые флаконы с навинчивающимся колпачком, который имеет внутреннюю крышку, не требующие дополнительного укупоривания.
Порошок хранить при температуре ниже +30°С, плотно закрытым. Использовать до даты, указанной на этикетке. Готовую среду не хранить, использовать свежеприготовленной.
Зарегистрировано в Росздравнадзор РФ

Источник

Pronadisa 1130 Основа бульона по Мюллеру-Кауфману, 500 гр (Mueller Kauffman Broth Base)

Изображение товара на сайте может отличаться от фактического вида товараPronadisa 1130 Основа бульона по Мюллеру-Кауфману, 500 гр (Mueller Kauffman Broth Base)

Pronadisa 1130 Основа бульона по Мюллеру-Кауфману, 500 гр (Mueller Kauffman Broth Base)

Pronadisa 1130 Основа бульона по Мюллеру-Кауфману, 500 гр (Mueller Kauffman Broth Base)

2 недели — 2 месяца

Основа бульона по Мюллеру-Кауфману рекомендуется в качестве селективного бульона для выделения сальмонелл из фекалий животных, загрязненных сточных вод, пищи, молока, мороженого и пастеризованных продуктов на яичной основе.

Использование более чем одного селективного бульона увеличивает выделение сальмонелл из проб с множественными серотипами. Для этих целей можно использовать Основу тетратионатного бульона (кат. № 1114).

Кауфман модифицировал формулу бульона, включив в ее состав бычью желчь и бриллиантовый зеленый в качестве селективных агентов для ингибирования грамположительных микроорганизмов. Тиосульфат натрия и йод приводят к образованию тетратионата и, таким образом, к ингибированию роста колиформ и других кишечных бактерий. Продукты кислотного разложения тетратионата, такие как серная кислота, нейтрализуются карбонатом кальция, действующим в качестве буфера. Salmonella spp. и Proteus spp. не ингибируются, так как способны к восстановлению тетратионата. Мясной пептон, мясной и дрожжевой экстракты являются источниками питательных веществ, необходимых для роста микроорганизмов: азота, витаминов, минеральных солей и аминокислот. Хлорид натрия поддерживает осмотический баланс.

Читайте также:  Стиральная машина электролюкс 10115 инструкция

Добавить 10 г пробы к 100 мл среды. Сильно встряхнуть и немедленно поместить колбы на водяную баню при 15°C на 15 минут, после чего инкубировать при 42–43°C в течение 6–24 часов.

Сделать пересев на Агар с бриллиантовым зеленым (кат. № 1078) через 18−24 часа и еще раз через 48 часов. Инкубировать чашки 18−24 часа при 35±2°C.

Микробиологический тест

Следующие результаты были получены при использовании среды с соответствующими добавками на тестовых культурах после инкубации при температуре 42–43°C и наблюдались через 6–24 часа.

Источник

Санитарный контроль

в пищевой промышленности

Среды для выявления патогенных бактерий семейства Enterobacteriaceae

Среда Мюллера. Среду используют для накопления микробов тифозно-сальмонеллезной группы. В простерилизованный сухим жаром флакон с 4,5 г мела асептично наливают 90 мл стерильного бульона, 10 мл простерилизованного текучим паром 50%-ного водного раствора гипосульфита и 2 мл раствора Люголя (йод 0,5, йодистый калий 0,4 г, дистиллированная вода 2 мл). Смесь взбалтывают до равномерного распределения мела в жидкости, разливают по 10— 15 мл и вносят исследуемый материал.

Среда Кауфмана. Она представляет собой модифицированную среду Мюллера. Состав среды: к 100 мл среды Мюллера добавляют 1 мл 0,1%-ного водного раствора бриллиантового зеленого и 5 мл стерильной бычьей желчи.

SS-arap (сальмонелла-шигелла-агар). Состав среды следующий: мясной экстракт 5 г, пептон 5 г, лактоза 10 г, желчные соли 8,5 г (или желчь бычья 100 мл), цитрат натрия 8,5 г, тиосульфат натрия 8,5 г, цитрат железа 1 г, агар-агао 13,5—20 г, бриллиантовый зеленый 0,33 мг, нейтральный красный 0,025 г, конечный рН 7—7,2.

Предварительно готовят мясной экстракт, пептон и агар, в 900 мл дистиллированной воды стерилизуют, затем добавляют отдельные ингредиенты, растворенные в небольших количествах воды, доводят общий объем до 1000 мл, кипятят 2—3 мин, разливают в чашки.

Сухой бактоагар Плоскирева. Состав среды: сухой питательный агар, желчные соли, лактоза, лимонно- и фосфорнокислый натрий, гипосульфит, йод, нейтральный красный, бриллиантовый зеленый, хлористый натрий. 0,6 г среды вносят в 100 мл холодной дистиллированной воды, тщательно размешивают, нагревают, помешивая до полного расплавления агара, при необходимости фильтруют. Разливают в чашки и подсушивают. Для более сильного подавления сапрофитной микрофлоры увеличивают содержание порошка до 7 г на 100 мл воды.

Пептонно-углеводные среды (или среды Гисса). Их применяют для дифференциальной диагностики микробов семейства Enterobacteriaceae. Состав среды следующий: стерильная дистиллированная вода 1000 мл, пептон 10 г, хлористый натрий 5 г, углевод 10 г, 16 мл 1%-ного спиртового раствора индикатора бромтимолового синего или 10 мл индикатора Андреде.

Состав индикатора Андреде следующий: 32 мл нормального раствора NaOH, 1 г фуксина кислого, 200 мл воды дистиллированной. Полученную смесь настаивают при комнатной температуре в течение 3 сут или при 37°С 24 ч, фильтруют, стерилизуют 3 дня текучим паром.

Среду разливают по 4—5 мл в стерильные пробирки с бродильными трубочками, стерилизуют при 112°С 12 мин или текучим паром 3 дня по 30 мин. Бродильные трубочки можно заменить полужидким (0,5—0,4%) агаром. В этом случае среду без углевода и индикатора стерилизуют при 121°С 15 мин, затем вносят углевод, растворенный в небольшом количестве стерильной дистиллированной воды, и индикатор, кипятят 10—15 мин в водяной бане, разливают в пробирки и стерилизуют при 112°С 12 мин.

Среда Биттера. Среда состоит из одноосновного фосфата натрия — 0,5 г, сернокислого аммония — 1 г, трехосновного лимоннокислого натрия — 2 г, хлористого натрия — 5 г, пептона — 0,05 г, рам-нозы 5 г, воды дистиллированной — 1000 мл.

Смесь кипятят до растворения ингредиентов, разливают в пробирки, стерилизуют 3 дня по 30 мин текучим паром. К суточной культуре исследуемого микроба добавляют несколько капель 1%-но-го спиртового раствора метилового красного.

Среда Штерна. Состав среды следующий: глицерин 10 мл, свежеприготовленный 10%-ный раствор сульфита натрия 20 г, насыщенный спиртовой раствор основного фуксина 2,5 г, 0,25%-ный водный раствор хризоидина 10 мл, питательный бульон 1000 мл.

Разливают в пробирки, стерилизуют при 112°С в течение 12 мин или текучим паром 3 дня по 30 мин.

Источник